達學堂·答疑討論
Q：切完片子立馬放固定液，老脫片怎么回事?
答：那就要找玻片和切片技術的原因，實際上實質細胞很難掉片，有時含脂肪等組織看起來絲絲拉拉，但鏡下實質組織都沒有掉。吹干后固定實際上更容易掉片。固定液里含冰醋酸太多也容易掉片。
Q：冰晶形成的原理？從哪里可以查到？四個動態的關系？哪四個動態？
答：非晶體高分子聚合物一般隨著溫度變化會有粘流態、高彈態、玻璃態三種不同的力學聚集態。在各態轉變中又特征性存在流動溫度、玻璃化溫度、分解溫度及脆點。我們冰凍切片就是在組織玻璃態進行。
Q：我做過子宮內膜的干固定和濕固定，兩種固定方式的染色結果差異很大，這種情況尤其是在冬天的時候容易發生，請問是為什么呢？
答：冰凍切片要即刻濕固定，晾干固定后染色差。這個原理我在講課時也分析了。很多情況要結合各地區的自然、室內環境分析，南方冬天濕冷，開空調，反而室內可能更干燥，石蠟切片靜電也大、發脆等，冰凍也一樣，晾干的程度對染色也有影響。
Q：一般切片厚度是多少？AF固定多少秒？
答：6-7um，理想固定1分鐘以上，因切片薄、95%酒精沉淀固定速度又快，一般二、三十秒也可以 。
Q：可以分享一下脂肪冰凍切片的經驗嗎？
答：沒有啥好經驗，盡量切唄，盡量把脂肪中的實質組織切上就行。市場上的快速冷凍儀，我也試用了，效果也不是很好，僅對含部分脂肪的乳腺等組織好點。有的用丙酮抽提等，我覺得沒必要，純脂肪就是很難玻璃化，切不好是正常的。
Q：表面解凍入固定液的意思是只要可以卸下組織應立即如固定液最好是嗎？
答：冷凍組織的解凍是個比較頭疼的問題，因為水的傳熱比冰慢4倍，所以組織凍得快、解凍慢；如果把冷凍的組織立馬放到水里（固定液里）組織表面會產生更多的冰晶，緩慢復溫時也會產生復溫冰晶；理論上快速復溫實際中很難操作，所以我一般把冷凍的組織先室溫放一會，組織表面變軟可以從樣本托上輕松取下時放到室溫固定液里。
Q：不加OCT組織切的不完整。濾紙感覺能切完整嗎？老師冰凍時不用OTC，用濾紙沾濕怎么操作？
答：這個要看組織，有的幾塊小的組織放在一個樣本托上，有的囊壁樣組織容易卷，就得用包埋劑；如果你的切片技術過硬，大部分組織不用包埋劑都可以切全。把濾紙剪成樣本托大小的圓片，使用時先用中性筆在濾紙邊寫上編號，再把濾紙在水里蘸濕，放在樣本托上，蘸的水不要太少，容易切得時候組織掉下來。
