達(dá)學(xué)堂·答疑討論
Q：冰晶形成原理？在哪查？
答：這個(gè)原理涉及很多相關(guān)學(xué)科知識(shí)，無機(jī)化學(xué)、有機(jī)化學(xué)、 細(xì)胞培養(yǎng)、生物大分子不同相態(tài)的熱力學(xué)定律、吉布斯自由能等等。我也是在很多的書籍及網(wǎng)站上學(xué)習(xí)，然后由把它們盡量和實(shí)際工作結(jié)合起來考慮， 試圖來解決冰晶和冷凍的相關(guān)問題。我也是只知道一點(diǎn)皮毛，大家可以多學(xué)習(xí)，包括熱力學(xué)定律、臨界尺寸，細(xì)胞生物學(xué)組織應(yīng)急反應(yīng)等等。
Q：有時(shí)間切冰凍時(shí)候，冰捶卸不下來，是怎么回事？用極冷臺(tái)了。
答：一要經(jīng)常清理冷錘冷凍面，保持清潔平整。二是等組織冷凍1/2后再蓋冷錘，蓋上去后等組織凍好后再取冷錘。
Q：一般組織速凍幾分鐘后形成玻璃態(tài)？
答： 按現(xiàn)在冰凍機(jī)的降溫速率和最低溫度（速冷臺(tái)可達(dá)-40度），2mm-3mm厚的組織一般2分鐘左右就可以，要實(shí)時(shí)觀察。
Q：甲狀腺組織做冰凍快速，切的時(shí)候表面組織還沒凍硬，組織切下來的薄片肉眼看還是有很多洞洞，像凍過了的樣子，這是為啥呢？
答：組組沒有凍好，就是說組組沒有進(jìn)入玻璃態(tài)，此時(shí)如果切片，組組的受到外力時(shí)形變很大，各種成分不能統(tǒng)一受力， 出現(xiàn)各種異常現(xiàn)象都很正常。 組織冷凍好后再切，如果過了脆點(diǎn)，發(fā)脆，可以適度復(fù)溫。
Q：冰凍切片中的肺組織怎么處理才能避免切片中的空洞？
答：肺臟終末組織-肺泡本身是薄壁空腔，在肺氣腫病變及結(jié)核、腫瘤等病變周圍經(jīng)常存在代償性肺氣腫，如有肺大泡時(shí)這種情況就更明顯。做冰凍時(shí)經(jīng)常遇到這種情況，冷凍后組織切面有不少空腔，不好展片，也容易出現(xiàn)絲絲拉拉感覺要掉片子了。一般這種情況如出現(xiàn)腫瘤等病變的周圍，不需要過多關(guān)注，冷錘不要壓得太早，組織容易變形，盡量用壓板（調(diào)整壓板的長度），一般切片染色問題不大。如果空洞很大（肺大泡）、也多，此時(shí)就要在組織周邊多加點(diǎn)膠，也可以往組織表面擠點(diǎn)膠，部分會(huì)滲入空洞中，切片后如蘇木素前片子在水里多泡10-20秒，把膠充分溶掉，要用專用OCT包埋劑，片子比平時(shí)厚1-2um。
Q：有的抗體推薦用EDTA，可以改為檸檬酸嗎？
答：大部分抗體兩種修復(fù)液都可以，具體需要實(shí)際工作中摸索條件。
Q：容易掉片的組織怎么處理？
答：首先還是要確保規(guī)范的組織處理，前序流程沒做好，不要老指望后序能有方法來彌補(bǔ)。
