達(dá)學(xué)堂·答疑討論
Q：切完片子立馬放固定液，老脫片怎么回事?
答：那就要找玻片和切片技術(shù)的原因，實(shí)際上實(shí)質(zhì)細(xì)胞很難掉片，有時(shí)含脂肪等組織看起來(lái)絲絲拉拉，但鏡下實(shí)質(zhì)組織都沒(méi)有掉。吹干后固定實(shí)際上更容易掉片。固定液里含冰醋酸太多也容易掉片。
Q：冰晶形成的原理？從哪里可以查到？四個(gè)動(dòng)態(tài)的關(guān)系？哪四個(gè)動(dòng)態(tài)？
答：非晶體高分子聚合物一般隨著溫度變化會(huì)有粘流態(tài)、高彈態(tài)、玻璃態(tài)三種不同的力學(xué)聚集態(tài)。在各態(tài)轉(zhuǎn)變中又特征性存在流動(dòng)溫度、玻璃化溫度、分解溫度及脆點(diǎn)。我們冰凍切片就是在組織玻璃態(tài)進(jìn)行。
Q：我做過(guò)子宮內(nèi)膜的干固定和濕固定，兩種固定方式的染色結(jié)果差異很大，這種情況尤其是在冬天的時(shí)候容易發(fā)生，請(qǐng)問(wèn)是為什么呢？
答：冰凍切片要即刻濕固定，晾干固定后染色差。這個(gè)原理我在講課時(shí)也分析了。很多情況要結(jié)合各地區(qū)的自然、室內(nèi)環(huán)境分析，南方冬天濕冷，開(kāi)空調(diào)，反而室內(nèi)可能更干燥，石蠟切片靜電也大、發(fā)脆等，冰凍也一樣，晾干的程度對(duì)染色也有影響。
Q：一般切片厚度是多少？AF固定多少秒？
答：6-7um，理想固定1分鐘以上，因切片薄、95%酒精沉淀固定速度又快，一般二、三十秒也可以 。
Q：可以分享一下脂肪冰凍切片的經(jīng)驗(yàn)嗎？
答：沒(méi)有啥好經(jīng)驗(yàn)，盡量切唄，盡量把脂肪中的實(shí)質(zhì)組織切上就行。市場(chǎng)上的快速冷凍儀，我也試用了，效果也不是很好，僅對(duì)含部分脂肪的乳腺等組織好點(diǎn)。有的用丙酮抽提等，我覺(jué)得沒(méi)必要，純脂肪就是很難玻璃化，切不好是正常的。
Q：表面解凍入固定液的意思是只要可以卸下組織應(yīng)立即如固定液最好是嗎？
答：冷凍組織的解凍是個(gè)比較頭疼的問(wèn)題，因?yàn)樗膫鳠岜缺?/span>4倍，所以組織凍得快、解凍慢；如果把冷凍的組織立馬放到水里（固定液里）組織表面會(huì)產(chǎn)生更多的冰晶，緩慢復(fù)溫時(shí)也會(huì)產(chǎn)生復(fù)溫冰晶；理論上快速?gòu)?fù)溫實(shí)際中很難操作，所以我一般把冷凍的組織先室溫放一會(huì)，組織表面變軟可以從樣本托上輕松取下時(shí)放到室溫固定液里。
Q：不加OCT組織切的不完整。濾紙感覺(jué)能切完整嗎？老師冰凍時(shí)不用OTC，用濾紙沾濕怎么操作？
答：這個(gè)要看組織，有的幾塊小的組織放在一個(gè)樣本托上，有的囊壁樣組織容易卷，就得用包埋劑；如果你的切片技術(shù)過(guò)硬，大部分組織不用包埋劑都可以切全。把濾紙剪成樣本托大小的圓片，使用時(shí)先用中性筆在濾紙邊寫(xiě)上編號(hào)，再把濾紙?jiān)谒镎簼瘢旁跇颖就猩希旱乃灰伲菀浊械脮r(shí)候組織掉下來(lái)。
