達學堂·答疑討論
Q：冰晶形成原理？在哪查？
答：這個原理涉及很多相關學科知識，無機化學、有機化學、 細胞培養、生物大分子不同相態的熱力學定律、吉布斯自由能等等。我也是在很多的書籍及網站上學習，然后由把它們盡量和實際工作結合起來考慮， 試圖來解決冰晶和冷凍的相關問題。我也是只知道一點皮毛，大家可以多學習，包括熱力學定律、臨界尺寸，細胞生物學組織應急反應等等。
Q：有時間切冰凍時候，冰捶卸不下來，是怎么回事？用極冷臺了。
答：一要經常清理冷錘冷凍面，保持清潔平整。二是等組織冷凍1/2后再蓋冷錘，蓋上去后等組織凍好后再取冷錘。
Q：一般組織速凍幾分鐘后形成玻璃態？
答： 按現在冰凍機的降溫速率和最低溫度（速冷臺可達-40度），2mm-3mm厚的組織一般2分鐘左右就可以，要實時觀察。
Q：甲狀腺組織做冰凍快速，切的時候表面組織還沒凍硬，組織切下來的薄片肉眼看還是有很多洞洞，像凍過了的樣子，這是為啥呢？
答：組組沒有凍好，就是說組組沒有進入玻璃態，此時如果切片，組組的受到外力時形變很大，各種成分不能統一受力， 出現各種異常現象都很正常。 組織冷凍好后再切，如果過了脆點，發脆，可以適度復溫。
Q：冰凍切片中的肺組織怎么處理才能避免切片中的空洞？
答：肺臟終末組織-肺泡本身是薄壁空腔，在肺氣腫病變及結核、腫瘤等病變周圍經常存在代償性肺氣腫，如有肺大泡時這種情況就更明顯。做冰凍時經常遇到這種情況，冷凍后組織切面有不少空腔，不好展片，也容易出現絲絲拉拉感覺要掉片子了。一般這種情況如出現腫瘤等病變的周圍，不需要過多關注，冷錘不要壓得太早，組織容易變形，盡量用壓板（調整壓板的長度），一般切片染色問題不大。如果空洞很大（肺大泡）、也多，此時就要在組織周邊多加點膠，也可以往組織表面擠點膠，部分會滲入空洞中，切片后如蘇木素前片子在水里多泡10-20秒，把膠充分溶掉，要用專用OCT包埋劑，片子比平時厚1-2um。
Q：有的抗體推薦用EDTA，可以改為檸檬酸嗎？
答：大部分抗體兩種修復液都可以，具體需要實際工作中摸索條件。
Q：容易掉片的組織怎么處理？
答：首先還是要確保規范的組織處理，前序流程沒做好，不要老指望后序能有方法來彌補。
