達(dá)學(xué)堂·答疑討論
Q：抗原修復(fù)時(shí)，什么時(shí)候該選擇酸性的修復(fù)液，什么時(shí)候該選擇堿性的修復(fù)液呢？ 有什么標(biāo)準(zhǔn)嗎？
答：沒有標(biāo)準(zhǔn)，每種新使用的抗體均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。當(dāng)然試劑說(shuō)明書會(huì)有推薦的修復(fù)液，可參考。
Q：如何消除背景色，減少背景染色呢？
答：產(chǎn)生背景非特異染色的原因很多，有組織處理質(zhì)量差、一抗?jié)舛冗^濃、抗體孵育時(shí)間長(zhǎng)或抗體質(zhì)量差等不同原因所致非特異染色，應(yīng)針對(duì)不同原因進(jìn)行處理。
Q：如果是外院會(huì)診很久之前的蠟塊要怎么選著操作方案呢？
答：若年限超過5年，抗原修復(fù)時(shí)間及抗體孵育時(shí)間均要延長(zhǎng)，一抗的稀釋度可能也要適當(dāng)降低（即一抗要濃一些），手工及儀器檢測(cè)條件不同。比如某一抗體常規(guī)檢測(cè)是Ventana MCC1 ，一抗30min/37℃ 年限較長(zhǎng)的庫(kù)存蠟塊，可能要用到 SCC1，一抗60min/37℃。這是舉例，具體的要測(cè)試和驗(yàn)證。
Q：高壓鍋修復(fù)時(shí)，修復(fù)液直接加在高壓鍋里，還是裝在染色缸里用水浴加熱加壓？
答：兩種都可以，但修復(fù)時(shí)間不一樣。若將修復(fù)液直接倒在高壓鍋內(nèi)，高壓鍋噴氣閥噴氣后計(jì)時(shí)3-5min;隔水高壓，時(shí)間可延長(zhǎng)，具體多少分鐘合適？不同抗體、不同檢測(cè)試劑盒會(huì)稍有區(qū)別，要測(cè)試。
Q：請(qǐng)問如何解決溫度低，導(dǎo)致免疫組化表達(dá)率低的問題。
答：·手工檢測(cè)：若樣本量不大，建議用25℃或37℃水浴箱恒溫孵育抗體；
·儀器檢測(cè)：通過空調(diào)調(diào)整溫度。
Q：如果用苦味酸固定，還需要抗原修復(fù)嗎？如果需要，那么相比甲醛修復(fù)時(shí)間要更長(zhǎng)還是更短？
答：這位老師所指的是單純的固味酸作為固定液？還是含有苦味酸的固定液？若固定液中含甲 醛，就應(yīng)該行抗原修復(fù)。
Q：手工修復(fù)抗原注意事項(xiàng)呢？
答：微波修復(fù)：（1）確?？乖迯?fù)時(shí)維持溫度為99-100℃，維持時(shí)間20-25min（計(jì)時(shí)是從修復(fù)液沸騰后開始計(jì)時(shí)），為確保修復(fù)溫度，不建議用大容器盛裝修復(fù)液進(jìn)行抗原修復(fù)；（2）確保組織在修復(fù)過程中必須浸泡在修復(fù)液中，必在時(shí)修復(fù)中途應(yīng)添加修復(fù)液；（3）正式用于臨床診斷前，先進(jìn)行修復(fù)條件驗(yàn)證；
高壓修復(fù)：（1）嚴(yán)格控制抗原修復(fù)時(shí)間，防止過度修復(fù)；（2）計(jì)時(shí)是從高壓鍋的壓力閥開始噴氣才進(jìn)始計(jì)時(shí)，一般3-5分鐘；（3）高壓修復(fù)加溫時(shí)間結(jié)束后，應(yīng)立即降壓，打開鍋蓋后室溫冷卻。
