達(dá)學(xué)堂·答疑討論
Q:抗原修復(fù)時(shí),什么時(shí)候該選擇酸性的修復(fù)液,什么時(shí)候該選擇堿性的修復(fù)液呢? 有什么標(biāo)準(zhǔn)嗎?
答:沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn),每種新使用的抗體均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。當(dāng)然試劑說(shuō)明書(shū)會(huì)有推薦的修復(fù)液,可參考。
Q:如何消除背景色,減少背景染色呢?
答:產(chǎn)生背景非特異染色的原因很多,有組織處理質(zhì)量差、一抗?jié)舛冗^(guò)濃、抗體孵育時(shí)間長(zhǎng)或抗體質(zhì)量差等不同原因所致非特異染色,應(yīng)針對(duì)不同原因進(jìn)行處理。
Q:如果是外院會(huì)診很久之前的蠟塊要怎么選著操作方案呢?
答:若年限超過(guò)5年,抗原修復(fù)時(shí)間及抗體孵育時(shí)間均要延長(zhǎng),一抗的稀釋度可能也要適當(dāng)降低(即一抗要濃一些),手工及儀器檢測(cè)條件不同。比如某一抗體常規(guī)檢測(cè)是Ventana MCC1 ,一抗30min/37℃ 年限較長(zhǎng)的庫(kù)存蠟塊,可能要用到 SCC1,一抗60min/37℃。這是舉例,具體的要測(cè)試和驗(yàn)證。
Q:高壓鍋修復(fù)時(shí),修復(fù)液直接加在高壓鍋里,還是裝在染色缸里用水浴加熱加壓?
答:兩種都可以,但修復(fù)時(shí)間不一樣。若將修復(fù)液直接倒在高壓鍋內(nèi),高壓鍋噴氣閥噴氣后計(jì)時(shí)3-5min;隔水高壓,時(shí)間可延長(zhǎng),具體多少分鐘合適?不同抗體、不同檢測(cè)試劑盒會(huì)稍有區(qū)別,要測(cè)試。
Q:請(qǐng)問(wèn)如何解決溫度低,導(dǎo)致免疫組化表達(dá)率低的問(wèn)題。
答:·手工檢測(cè):若樣本量不大,建議用25℃或37℃水浴箱恒溫孵育抗體;
·儀器檢測(cè):通過(guò)空調(diào)調(diào)整溫度。
Q:如果用苦味酸固定,還需要抗原修復(fù)嗎?如果需要,那么相比甲醛修復(fù)時(shí)間要更長(zhǎng)還是更短?
答:這位老師所指的是單純的固味酸作為固定液?還是含有苦味酸的固定液?若固定液中含甲 醛,就應(yīng)該行抗原修復(fù)。
Q:手工修復(fù)抗原注意事項(xiàng)呢?
答:微波修復(fù):(1)確保抗原修復(fù)時(shí)維持溫度為99-100℃,維持時(shí)間20-25min(計(jì)時(shí)是從修復(fù)液沸騰后開(kāi)始計(jì)時(shí)),為確保修復(fù)溫度,不建議用大容器盛裝修復(fù)液進(jìn)行抗原修復(fù);(2)確保組織在修復(fù)過(guò)程中必須浸泡在修復(fù)液中,必在時(shí)修復(fù)中途應(yīng)添加修復(fù)液;(3)正式用于臨床診斷前,先進(jìn)行修復(fù)條件驗(yàn)證;
高壓修復(fù):(1)嚴(yán)格控制抗原修復(fù)時(shí)間,防止過(guò)度修復(fù);(2)計(jì)時(shí)是從高壓鍋的壓力閥開(kāi)始噴氣才進(jìn)始計(jì)時(shí),一般3-5分鐘;(3)高壓修復(fù)加溫時(shí)間結(jié)束后,應(yīng)立即降壓,打開(kāi)鍋蓋后室溫冷卻。