達學堂·答疑討論
Q：檸檬酸高壓修復溫度和時間是多少？是高壓鍋檸檬酸燒開一直修復15分鐘嗎？
答：在南京這樣海拔的地方，檸檬酸高壓修復的溫度達到100多度是沒有問題的，時間的話大概控制在15分鐘左右。檸檬酸高壓修復的時間總體對組織形態的影響較小，所以這個修復時間比堿性修復的時間要長。當然15分鐘這個時間的前提是組織處理要保證是規范的，如果組織處理不好的話，這個修復時間可能會造成一定的涂片。如果是堿性修復的話，會對組織形態有一定的損壞，要特別注意的是，在自然冷卻的過程中，堿性修復仍然會對組織有一定的影響，可能會造成過度修復的后果。關于高壓鍋檸檬酸燒開一直修復15分鐘，我們是燒開以后放進去，然后維持15分鐘，這個時間實際操作下來的話對于檸檬酸來說的話問題不是很大，而且修復的效果也很好，對組織的破壞很小。
Q：免組化包埋時強調溫度對抗原的影響，抗原修復時高溫高壓為什么不會造成抗原的破壞呢？
答：應該是沒有影響的，但有些單位包埋時會用鑷子在酒精燈上燒一下，要注意這時候鑷子的溫度蠻高的，抗原修復的時候可以達到100度的高溫，無論是對形態也好，抗原也好，都沒有影響。
Q：做甲狀腺組織冰凍，鏡下總是會有類似氣泡的東西，已經影響醫生看片了。
答：這種現象比較常見，過去我們在很多群里討論過這個問題，沒有絕對的消除方法，這種現象存在于膠紙豐富飽滿的的濾泡多一點，中央的空洞在顯微鏡下有立體感，微調時似多層中空的小洞，空洞壁比較厚，呈紫黑藍色，也不像蘇木素著色，應該是這種結構的光反射，這種現象，我當時分析是冷凍時濾泡中央的高濃度/聚集的甲狀腺球蛋白（中性糖蛋白）會冷凍到脆點以下并局部有高滲非凍水環境，所以經酒精等濕固定后收縮造成膠紙收縮梯度，中央最明顯，高滲非凍水丟失。后來我染了幾張不同固定液的比較，發現這種現象在甲醇和丙酮固定中最明顯（但此種固定染色比較艷麗），用95%酒精+5%冰醋酸固定后減少， 片子略晾干后固定效果比較明顯，但染色就不鮮艷，有的膠質會脫失。我的建議是1、甲狀腺組織不要冷凍時間過長，如果膠質脆，復溫適度；2、可用AF或95%酒精+5%冰醋酸固定，略晾一下再固定；3、入蘇木素前在水里多泡幾十秒；4、濕封切片（不能晾干后再入二甲苯）。你在實踐中再摸索。
Q：現在腫瘤的浸潤深度臨床要求高，取材就比較寬，現在大組織大切片有必要限制在1.5#1.5#0.2
答：其實“大組織大切片”在根治性標本中很常見，原國家衛生部的技術操作常規中規定的標本取樣大小基本上都被打破。從臨床病理工作實際情況來看，標本過大的影響遠沒有過厚的影響大，2毫米的厚度考慮到的是固定和脫水等試劑的滲透能力與時效。平常包埋時，面積過大的標本很難包埋平整，（包埋盒也放置不下）也難以切片完整。因此，最好不要過大過厚。
Q：切片機可以把刀座等零件拆下來水煮嗎？然后擦干凈再組裝。
答：不建議用水煮的方法清除刀座等配件上的蠟屑和組織碎片。因刀座上有不少位置是需要加注潤滑劑的，水煮后容易造成金屬元件表面腐蝕甚至變形。因金屬的熱脹冷縮特性，水煮極易影響刀座的穩定性，嚴格的講，加熱的方法盡量少用，我們最推薦的方法還是每一次使用后的及時清潔！用軟毛刷清潔！
Q：冰凍組織過小，像切緣比較薄小的時候，應該怎么加冷凍劑才能比較好切到位？
答：一般是先加注包埋劑做一個基座，然后在這個基座上再加包埋劑凍標本，并且一定要及時用冷錘把標本壓平整。切片時注意正確調整樣本角度，否則無法切完整。
Q：主流的幾種免疫組化儀都有抗體混勻么？
答：主流的全自動免疫組化儀都有試劑混勻技術的，這是該類設備必不可少的功能。
